多 環 芳 烴 ( polycyclic aromatic hydrocarbons， PAHs) 是一類具有強致癌，致畸，致突變危害的環境持 久有機污染物。對 PAHs 污染的危害及風險評估 是當今環境保護領域的重要研究課題。沉積物中多環 芳烴的含量可以體現水體的污染狀況，為水污染治理 提供更全面的評估數據。本課題組建立了凝膠滲透色譜－液相色譜法測定沉積物中多環芳烴含量，具有很 高的選擇性和靈敏度。但多環芳烴在環境中本底 較高，測定過程中容易造成交叉污染，對從業人員要求 很高。因此識別測定過程中的關鍵環節，從而在實驗 過程中重點控制以提高檢測質量是十分必要的。

1 材料與方法

1. 1 儀器與試劑

Agilent 1200 液相色譜儀附熒光 檢測器( 美國 Agilent 公司) ，Gilson 凝膠滲透色譜儀 ( 美國 Gilson 公 司) ，KQ-500DE ( 昆山舒美超聲儀器有限公司 ) ; TGL16 高速冷凍離心機( 長沙英泰儀器有限公司) ; VOＲTE－X 渦旋混勻器( 海門市其林貝爾儀器制造有 限公司) ; 旋轉蒸發儀( 上海亞榮生化儀器廠) 。16 種 多環芳烴混合標準儲備液( 2 000 mg /L，上海安譜科學儀器有限公司) ，乙腈( 色譜純，Merk 公司) ; 乙酸乙酯 ( 色譜純，Merk 公司) ，環己烷( 色譜純，Merk 公司) ，其 他試劑除特別說明，均為分析純。實驗用水為經 Millipore 處理的一級水。樣品采自湘江，冷凍干燥樣品，并 剔除石子，纖維絲等雜質，磨細，用 100 目篩子篩分樣 品，保存于塑料袋中。

1. 2 方法

1. 2. 1 樣品前處理

稱取樣品 5 g 于 50 ml 離心管 中，加入環己烷－乙酸乙酯( 1 ∶ 1，V /V) 10 ml，超聲提 取 15 min，8 000 r/min 離心 10 min，取 5 ml 上清液上 GPC 凈化。GPC 以環己烷－乙酸乙酯( 1 ∶ 1，V /V) 為 流動相，流速為 5. 0 ml /min，收集 19 ～ 50 min 餾分，紫 外檢測波長為 254 nm，收集液于 40 ℃ 水浴旋轉濃縮 至近干，用環己烷－乙酸乙酯( 1 ∶ 1，V /V) 轉移至 10 ml 定量管中，氮吹至近干，轉移至 10ml 容量瓶中加乙腈 定容，混勻，待 HPLC－FLD 測定。

1. 2. 2 色譜條件

色譜柱: PAH C18 柱( 4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ; 柱溫: 30 ℃，流動相及梯度: A 為乙 腈，B 為水; 0～5 min，50% A，5～20 min，50% ～ 99% A， 20～36 min，99% A，36～ 37. 5 min，1% ～ 50% A; 37. 5 ～ 40 min，50% A; 流速: 1. 5 ml /min; 進樣量: 10 μl; 檢測波長見表 1。

1. 2. 3 標 準 溶 液 配 制

吸取標準儲備液 ( 2 000 mg /L) 50 μl 于 10 ml 容量瓶中，用乙腈定容至 刻度制備成 10. 0 mg /L 標準中間液Ⅰ，吸取 100 μl 中 間液Ⅰ于10．0 ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度制備成 100 μg /L 標 準 中 間 液 Ⅱ，分別吸取標準中間液 Ⅱ 0. 10、0. 20、0. 50、1. 0 ml 至 10. 0 ml 容量瓶中，用乙腈 定容，制備成多環芳烴系列濃度為 1. 0、2. 0、5. 0、 10. 0 μg /L。按 1. 2. 2 色譜條件，以濃度為橫坐標，峰 面積為縱坐標進行線性回歸。

1. 3 數學模型

X = c×V×Z m ，其中 X 為沉積物中多環 芳烴含量( μg /kg) ; c 為從標準曲線獲得的多環芳烴含 量( μg /L) ; V 為樣品溶液定容體積( ml) ; m 為樣品質 量( g ) 。根 據 計 算 公 式，建 立 測 量 模 型 X = f ( c， V，m) 。

2 結 果

對于測定方法的不確定度，其 主要來源于前處理步驟和儀器測定步驟。前者包括稱 量、定容、標準溶液配制和凈化等過程，其中稱量不確 定度來源于天平; 定容不確定度主要來源于移液器、容 器和定容溶液的選擇; 標準溶液配制不確定度來源于 標準品的純度、稀釋過程和標準曲線擬合。后者則主 要以回收率不確定度分量和重復性不確定度分量來體 現。對于結果低于檢出限的組分，其不確定度評定步 驟與檢出組分的評定步驟類似，參照 GB /T 27404 － 2008 附錄 F 方法檢測低限計算公式 CL = 3×Sb /b， Sb 為空白標準偏差，b 為標準曲線斜率。由于采用液 相色譜法，需要積分獲得峰面積數值，因此同時參考了 環境監測分析方法標準制修訂技術導則規定的方 法檢出限計算程序( 按照樣品分析的全部步驟，對濃 度值或含量為估計方法檢出限 2 ～ 5 倍進行 n 次平行 測定。根據平行樣品分析結果的標準偏差計算方法檢 出限) 采用“接近空白”即檢出限的 2 倍進行空白加標 進行回收率和重復性不確定度的評定，由于其測定結 果低于標準曲線線性范圍，采用標準曲線擬合的不確定度會導致存在較大的誤差，因此低于檢出限的組分 忽略標準曲線擬合的不確定度評定。

3 討 論

采用精度 為萬分之一的電子天平稱量 5. 0 g( 精確至0. 0001 g) 樣品，根據天平檢定證書其最大允差為±0. 0005 g，按 照均勻分布( k =槡3 ) ，則天平的最大允差導致的標準 不確定度和稱量引入的相對不確定度分別為 u( m) = a k = 0．0005 槡3 = 0. 00029 g，urel ( m) = u( m) m × 100% = 0. 0058%。樣品 定容體積引入的不確定度包括提取后取 5 ml 上清液 過 GPC 凈化及將處理后的樣品溶液移入 10 ml 容量 瓶中帶來的不確定度。將處理后的樣品溶液移入 10 ml 容量瓶中，10 ml A 級容量瓶的標準不確定度包括玻璃量器的容量允差 u( VA) 和溫度變化產生的誤差 u( VC) 組成。國家計 量檢定 規 程 JJG196 － 2006 《常用玻璃儀器檢定規 程》中規定，20 ℃時 10 ml 容量瓶( A 級) 的容量最 大允許誤差為±0. 02 ml。而乙腈在溫度波動 20±5 ℃ 時，其膨脹系數為 1. 37 × 10－3 /℃。按均勻分布( k = 槡3 ) ，容量瓶容量允差引入的不確定度為 u ( VA ) = 0．02 槡3 = 0．0073 ml，溫度波動引起的體積不確定度為 u ( Vc ) = 5×1．37×10－3 槡3 = 0．00396 ml，則樣液移入 10 ml 容量瓶 中 產 生 的 標 準 不 確 定 度 為 u ( 移 2 ) = u2 ( VA) +u2 槡 ( VC ) = 0．0083 ml，相對標準不確定度為 urel ( 移 2) = u( 移 2) 10 ×100% = 0．083%。

4 結 論

采用 A 類不確定度評定對凝膠滲透色譜－液相色 譜法測定沉積物中多環芳烴含量的測定過程進行不確 定來源分析及各分量評定，評定結果表明該方法不確 定度主要來源于標準曲線計算，測定重復性和回收率 試驗。這要求我們在試驗過程必須對設備精心調試， 加強日常維護，同時規范實驗操作，以減少在樣品前處 理過程產生的不確定度。