植物多糖（ｐｌａｎｔ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）是從植物中 提取得到的一種富含醛單糖（鼠李糖、阿拉伯糖、木 糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖等）和酮單糖（果糖）、 通過糖苷鍵連接在一起形成的多聚物。大量研究證 明，許多植物多糖均具有多種生物活性和生理功能， 如免疫調節、抗腫瘤、抗氧化、抗疲勞、 控制血糖以及保護肝功能等，而且對機體無毒 副作用。近幾十年，已有近 10 種植物多糖（如枸杞 多糖、香菇多糖、人參多糖以及豬苓多糖等）用于抗 腫瘤、抗艾滋病及糖尿病治療，并已進入臨床實驗階段。

1 實驗部分

1．1 儀器與試劑

高效液相色譜－串聯質譜（ＬＣ ／ ＭＳ－2010ＥＶ，日 本 Ｓｈｉｍａｄｚｕ 公 司）；色 譜 柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ－Ｃ18 （100 ｍｍ×4. 6 ｍｍ，3. 5 μｍ）；ＫＱ－500ＤＥ 型超聲波清洗 儀（昆山舒美超聲儀器有限公司）；ＬＧＪ－10Ｃ 真空冷凍 干燥機（北京四環科學儀器廠有限公司）；ＪＣ－ＺＦ 型 旋轉蒸發儀（上海丹鼎國際貿易有限公司）。 單糖標準品：果糖（ｆｒｕｃｔｏｓｅ，Ｆｒｕｃ）、葡萄糖 （ｇｌｕｃｏｓｅ，Ｇｌｕ）、鼠 李 糖 （ｒｈａｍｎｏｓｅ，Ｒｈａ）、木 糖（ｘｙｌｏｓｅ，Ｘｙｌ）、阿拉伯糖（ａｒａｂｉｎｏｓｅ，Ａｒａ）、甘露糖 （ｍａｎｎｏｓｅ，Ｍａｎ）、半乳糖（ｇａｌａｃｔｏｓｅ，Ｇａｌ）、脫氧 核糖（ｒｉｂｏｓｅ，Ｒｉｂ）（純度＞99％，上海中秦化學試劑 有限公司）；雙糖標準品：蔗糖（ｓｕｃｒｏｓｅ）、麥芽糖 （ｍａｌｔｏｓｅ）（純度＞ 99％，上海中秦化學試劑有限公 司）；衍生化試劑：ＰＭＰ（上海晶純試劑有限公司）； 透析袋（截留相對分子質量 8 000，上海新睿生物科 技有限公司）；ＳＺ－97 自動三重水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）；氨 水、鹽 酸、氫氧化鈉及三氟乙酸 （ＴＦＡ）等其余試劑為分析純（天津市大茂化學試 劑廠）。

1．2 標準溶液的制備

準確稱取 0. 018 0 ｇ 單糖標準品，用氨水定容至 5 ｍＬ，各單糖標準溶液的質量濃度 均 為 3 600 ｍｇ ／ Ｌ，儲存在 4 ℃冰箱中備用。 分別準確稱取 8 種單糖標準品各 0. 036 ｇ，用濃 氨水（28％）定容至 10 ｍＬ，混合單糖標準溶液中各 單糖的質量濃度均為 3 600 ｍｇ ／ Ｌ，儲存在 4 ℃冰箱 中備用。 準確移取不同體積的上述混合單糖標準溶液 （3 600 ｍｇ ／ Ｌ），用氨水稀釋成系列質量濃度（0. 18 ～ 38. 8 ｍｇ ／ Ｌ）的標準工作溶液。 從市場購買 4 個地區種植的枸杞干果。1＃樣品 為寧夏中寧枸杞，2＃樣品為新疆精河枸杞，3＃樣品為 河北苦枸杞，4＃樣品為云南黑枸杞。

1．3 樣品處理

枸杞中多糖的提取采用 80％ （ｖ ／ ｖ）的乙醇提取 法。將枸杞干果置于真空干燥烘箱內，于 50 ℃下烘干后粉碎，稱取干燥枸杞干果粉末置于燒杯 中，加體積分數為 80％ 的乙醇，在 80 ℃水浴中提取 0. 5 ｈ，過濾濾渣，加蒸餾水在 100 ℃水浴中再提取 4 ｈ，重復 2 次，合并濾液。 濾液采用 Ｓｅｖａｇ 法脫去蛋白質后，加入活性 炭，70 ℃水浴 1 ｈ，過濾除去活性炭。濾液用旋轉蒸 發儀濃縮至黏稠，得到去除蛋白質和色素的粗多糖。 取適量枸杞粗多糖置于透析袋中（截留相對分子質 量 8 000），吊于裝有蒸餾水的大燒杯內，使其充分 與水接觸，多次換水，透析 24 ｈ 以除去小分子化合 物和游離的單糖。將透析過的多糖置于蒸發皿中， 冷凍干燥，得到相對純凈的枸杞多糖。將 4 個不同 產地 10 個批次的枸杞干果按上述方法提取，制得枸 杞多糖。

2 結果與討論

在強堿 ＮａＯＨ 條件下，采用 ＰＭＰ 衍生化單糖 是當前最為普遍的單糖修飾技術，但是很難檢測到 ＰＭＰ 衍生化果糖產物的信號。因此，考 察 ＰＭＰ 衍生化單糖環境對衍生化產物的影響尤為 必要。分別移取 Ｆｒｕｃ 和 Ｇｌｕ 水溶液 300 μＬ 于離心管 中，加入 300 μＬ 0. 3 ｍｏｌ ／ Ｌ ＰＭＰ－甲醇溶液和 300 μＬ 0. 3 ｍｏｌ ／ Ｌ 的氫氧化鈉溶液，渦旋混合，按 1. 3. 4 節方法進行衍生化實驗。在 ＮａＯＨ 環境下，ＰＭＰ 衍 生化 Ｇｌｕ 和 Ｆｒｕｃ 產物的總離子流色譜圖及其對應 的質譜圖，可觀察到 ＰＭＰ 衍生化 Ｇｌｕ 產物的 離子化信號很弱，其衍生化產物的加和離子 ｍ ／ ｚ 為 511，和一致。ＰＭＰ 修飾果糖的衍生化產 物無信號，也一致。實驗結果再次證 明，在 ＮａＯＨ 的強堿性環境下，ＰＭＰ 難以修飾果糖。 以氨水代替 ＮａＯＨ，進一步考察在溫和的ＮＨ3·Ｈ2Ｏ 環境下，ＰＭＰ 能否衍生化果糖。

3 結論

在溫和的 ＮＨ3·Ｈ2Ｏ 環境下，采用 ＰＭＰ 衍生 化標記單糖，基于 ＨＰＬＣ－ＭＳ 聯用技術，在正離子 ＳＩＭ 模式下，成功確認和測定了果糖和多種醛單糖 （Ｍａｎ、Ｒｈａ、Ｇａｌ、Ｇｌｕ、Ｘｙｌ、Ａｒａ、Ｒｉｂ）。首次提出在 溫和的 ＮＨ3·Ｈ2Ｏ 條件下，ＰＭＰ 標記果糖的衍生化 機理。以雙糖為目標物，優化水熱法酸催化水解多 糖的最佳水解溫度（70 ℃）和水解時間（50 ｍｉｎ）， 建立了水熱法水解多糖和溫和氨水環境下 ＰＭＰ 柱 前標記多糖水解產物中的果糖和多種醛單糖的確認 方法及含量測定方法，成功用于枸杞多糖水解產物 中單糖組分的確認及含量測定。