五味子為木蘭科植物五味子〔Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.〕干燥成熟的果實,在《神農本草經》中被列為上品中藥,味酸、性甘溫,具有斂肺、滋腎、生津、收 汗、澀精之功效。五味子屬于多年生藤本植物,可用于生產藥品、保健品、飲品及化妝品等。五味子中含 有多種化學成分,如揮發性成分、木質素類、有機酸類、 糖類等。早期相關研究主要集中在木脂素等脂溶性 成分。現代醫學研究表明,五味子多糖具有抗疲勞、 抗焦慮、抗變態、保護肝損傷、保護腸道及清除自由基等 多種生理活性,有重要的研究意義和開發利用價值。
1 材料、試劑與儀器
1.1 材料與試劑
五味子,采收于吉林省集安市,經中國農業科學院 特產研究所許世泉研究員鑒定為木蘭科植物北五味子 〔S. chinensis (Turcz.) Baill.〕的果實;單糖標準品葡萄糖 (Glc)、鼠李糖(Rha)、半乳糖(Gal)、半乳糖醛酸(GalA)、 阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖醛酸(GlcA)、甘露糖(Man)(Sigma-Aldrich 公司);DPPH(Cat# CD4891-500MG,Coolaber 公司);1-苯基-3 甲基-5-吡唑酮(PMP)、鹽酸-甲醇 標準溶液(源葉生物公司);維生素 C(VC)(天津市光 復精細化工研究所);去離子水,由特種經濟動植物加 工實驗室自制;其他試劑均為國產分析純。
1.2 儀器
QD8J(BL)單煎機(青島達爾電子機械銷售有限 公司);TGL-16A高速臺式離心機(上海安亭科學儀器 廠);FD-1A-50 低溫冷凍干燥機(北京博醫康技術有限 公司);昆山舒美KQ-500DE超聲波清洗機;HHS型電熱恒溫水浴鍋(上海博訊實業有限公司醫療設備廠);高效液相色譜儀、LC-16 溶劑 輸送泵、CTO-16 柱溫箱、SPD-M20A 紫外檢測器 (日本島津儀器有限公司);Hypersil ODS2 C18 色譜柱 (4.6 mm×250 mm,5 m)(大連依利特分析儀器有限公 司);721G可見分光光度計(上海儀電分析儀器有限公 司);WP-UP-WF-40微量分析型超純水機(四川沃特爾 水處理設備有限公司)。
2 方法
2.1 五味子總多糖的提取
選用干燥的北五味子 500 g,加入 5 L 去離子水,使用單煎機 100 ℃提取 2 h,4 層紗布過濾,殘渣重復 提取 3 次,合并濾液,使用電磁爐保持微沸狀態濃縮濾 液至 1 L,放至室溫,離心(4 500 r/min,10 min),棄去沉 淀。向上清液中加入醫用酒精,調節乙醇終濃度為 80%,沉淀過夜,離心(4 500 r/min,10 min),收集沉淀。 向沉淀中加入 800 mL 蒸餾水,充分溶解,重復醇沉 1 次。沉淀用蒸餾水復溶后冷凍干燥,得五味子總多糖 (Water-soluble S. chinensis polysaccharides ,WSP)。
3 結果與分析
五味子多糖產率為 5.2%。通過 HPLC 分析單糖 組成,結果表明,WSP 主要由 GalA 組成 (70.3%),其余還有 Glc(11.1%)和 Gal(7.8%)等; WSP-30 主要是 GalA(96.2%)組成;WSP-60 主要由 GalA(83.8%)組成,此外還含有少量的 Rha(4.0%)、 Ga(l 6.5%)、Glc(3.2%)和Man(2.4%);WSP-80主要由 GalA(45.7%)和 Glc(26.8%)組成。WSP-30、WSP-60 和 WSP-80 中均含有豐富的 GalA,其中,WSP-30 中 GalA 含量更是高達 96.2%。GalA 是一種果膠類物質 的主要成分,分子量較大,在乙醇中的溶解度小,低濃 度乙醇易使其沉淀,GalA 在 WSP-30、WSP-60、 WSP-80 中的含量依次降低。IC50 值也是表示抗氧化能力的一個指標,IC50 值 越低,抗氧化劑的自由基清除能力越強。WSP-30 的 DPPH 自由基清除能力最強,IC50 值為 0.101 mg/mL; 其次為陽性對照Vc、WSP,IC50值分別為0.163 mg/mL、 0.173 mg/mL;WSP-80、WSP-60 的 IC50 值分別為 0.525 mg/mL、1.946 mg/mL。
4 討論
果膠是多糖的一種,在許多植物中含量豐富,具有 多種活性。GalA為果膠的標志性組分,通常認為,GalA 含量超過65%的多糖可稱為果膠,因此,WSP、WSP-30 與 WSP-60 均屬于不可多得的天然果膠類物質,尤其 是 WSP-30。許多果膠可作為增稠劑、穩定劑等應用 于食品工業中,或作為一種水溶性膳食纖維應用于保 健食品和藥品中。對WSP 及其子級分的甲酯化度、 凝膠特性等進行研究和分析,可以為五味子多糖的應 用提供基礎,也是課題組下一步工作的重點。尿病、自身免疫性疾病等。自由基氧化應激反應對許 多生物大分子均有損傷作用,最常見的是對蛋白質和 DNA 的破壞。
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