帶皰止痛合劑是南京中醫(yī)藥大學(xué)連云港附屬 醫(yī)院的協(xié)定處方制劑，該藥物由柴胡、郁金、白芍、 制香附、元胡、桃仁、紅花、麥冬、丹皮、丹參、生地、 酸棗仁、生甘草等藥味制成，其中柴胡為君藥，郁 金、白芍為臣藥，現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法主要是薄層 鑒定法，對君臣藥進行定性鑒別，尚無對其主要成 分進行含量測定的方法，而對主要活性成分進行含 量測定，已是中藥質(zhì)量控制的必然趨勢，故對帶皰 止痛合劑的主要活性成分進行含量測定，是一個亟 待解決的課題。

Agilent 1200 型高效液相色譜儀，含 Model 1200 型檢測器; FA － G 系列感應(yīng)窗型分析天 平: 常州萬臺天平儀器有限公司; KQ － 100VDB 型雙 頻 超 聲 波 清 洗 器: 昆山舒美超聲儀器有限公司; KH19A 型臺 式 離 心 機: 湖南凱達科學(xué)儀器有限 公司。

帶皰止痛合劑: 由柴胡、郁金、白 芍、制香附、元胡、桃仁、紅花、麥冬、丹皮、丹參、生 地、酸棗仁、生甘草等藥味制成，由南京中醫(yī)藥大學(xué) 連云港附屬醫(yī)院制備。柴胡皂苷 A 對照品( 批號: 101205 － 201603) 、莪術(shù)二酮對照品( 批號: 111023 － 201608 ) 、芍 藥 苷 對 照 品 ( 批 號: 120621 － 201607) : 均購于中國食品藥品檢定研究院。乙腈 為色譜純: Fisher 公司; 氨水、正 丁 醇、甲 醇( 分 析 純) : 浙江三鷹化學(xué)試劑有限公司; 水為超純水。

Agilent Zorbax Eclipse XDB － C18色 譜柱( 4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ; 混合流動相: 乙腈 為流動相 A，0. 5% 醋酸溶液( 以三 乙 胺 調(diào) pH 至 6. 0) 為流動相 B，梯度洗脫，洗脫順序見表 1; 流速: 1. 0 mL·min － 1 ; 柱溫: 25℃ ; 進樣量: 10 μL; 檢測波 長: 215 nm。 

2. 2 混和對照品溶液制備

精密稱取柴胡皂苷 A 對照品 225. 00 mg、莪術(shù)二酮對照品 50. 00 mg、芍藥 苷對照品 125. 00 mg，分別置于25 mL量瓶中，加甲 醇溶解并定容，搖勻，即得柴胡皂苷 A 對照品儲備 溶液、莪術(shù)二酮對照品儲備溶液、芍藥苷對照品儲 備溶 液; 分 別 精 密 量 取 3 種對照品儲備溶液各 2 mL，置于同一25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度， 制成含柴胡皂苷 A、莪術(shù)二酮、芍藥苷濃度分別為 0. 720、0. 160、0. 400 g·L － 1的混和對照品溶液。

精密量取帶皰止痛合劑 25 mL，加入 0. 5% 磷酸水溶液( 含 0. 1% 三乙胺) 25 mL，回流提取 25 min 后，離心 5 min，取上清液， 下層沉淀再用 0. 5% 磷酸水溶液( 含 0. 1% 三乙胺) 25 mL，回流提取 25 min 后，離心 5 min，取上清液， 將兩次所得的上清液合并，用水飽和的正丁醇萃取 2 次，每次 50 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用甲醇 溶解，定容至 5 mL 量瓶中，搖勻，離心 5 min，取上清 液，即得供試品溶液。

按照帶皰止痛合劑的 原方分別去除柴胡、郁金、白芍，按帶皰止痛合劑的 制備工藝進行制備，即得不含柴胡的陰性供試品溶 液、不含郁金的陰性供試品溶液、不含白芍的陰性 供試品溶液。

以乙醇、水、 0. 5% 磷酸水溶液( 含 0. 1% 三乙胺為提取溶劑，對 超聲提取、熱回流提取、冷浸提取進行了考察，并對 提取次數(shù)、提取時間、萃取溶劑也進行了研究，實驗 結(jié)果表明，以 0. 5% 磷酸水溶液( 含 0. 1% 三乙胺) 為提取溶劑，熱回流提取 2 次，提取 30 min，水飽和 正丁醇萃取 2 次，此制備方法所得的供試液中柴胡 皂苷 A、莪術(shù)二酮、芍藥苷含有量最高。考察了 3 種流動相，分別為: 甲醇 － 乙腈、乙腈 － 0. 5% 醋酸溶液( 以三乙胺調(diào) pH 至 6. 0) 、甲醇 － 0. 5% 醋酸溶液( 以三乙胺調(diào) pH 至 6. 0) ，實驗結(jié)果顯示，以乙腈 － 0. 5% 醋酸溶液( 以三 乙胺調(diào) pH 至 6. 0) 為流動相，梯度洗脫，柴胡皂苷 A、 莪術(shù)二酮、芍藥苷分離效果好，干擾少，峰形較佳。考察了 4 個檢測波長，分別為: 205、215、245、258 nm，實驗 結(jié)果顯示，當檢測波長為 215 nm 時，柴胡皂苷 A、莪 術(shù)二酮、芍藥苷 3 種成分均有較大吸收峰，峰型好， 干擾少，分離較高。



 

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