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前胡類藥材HPLC特征圖譜研討

返回列表 來源:未知 發布日期:2019-08-09 09:27【

前 胡,首 載 于《名 醫 別 錄》,列 為 中 品 ,來 源于傘形科前胡屬植物白花前胡 Peucedanum praeruptorum Dunn 的干燥根,具有降氣化痰及散風清 熱的功效,用于痰熱喘滿,咳痰黃稠,風熱咳嗽痰多等 癥的治療 ,主產于甘肅、河南、貴州等地 。現代 研究發現,前胡的化學成分主要包括香豆素、菲醌、有 機酸、甾醇及揮發油等類化合物 ,具有止咳、平喘 等藥理活性。


1 儀器與試藥

Waters 2695 高效液相色譜儀(包括四元泵、PDA 檢 測 器、自 動 進 樣 器 及 Empower 工作站;Waters 公 司),Mettler MS105DU 電 子 天 平(Mettle-Toledo 公 司),KQ-300DA型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。Umetrics Ezinfo 數據處理軟件 (Waters 公司)。 甲醇為色譜級,水為 Milli-Q 超純水,其他試劑 均為分析純。對照品白花前胡甲素(批號 111711- 200602,含 量 以 100% 計)、白 花 前 胡 乙 素(批 號 111904-201203,含量以 98.0% 計)、紫花前胡苷(批 號 111821-201604,含 量 以 99.6% 計)均 來 自 中 國 食品藥品檢定研究院;白花前胡 E 素(批號 DFZY20180112,含量以 99.9% 計)購自成都瑞芬思生物技 術有限公司。采集時間為 2017 年 8 月—12 月,并經中國食品藥品檢定研究院程顯 隆研究員鑒定。


2 方法

2.1 液相色譜條件


采用Aglient TC-C18(2)色 譜 柱(4.5 mm×250 mm,5 μm),以水(A)- 甲醇(B)為流動相,梯度洗脫 (0~15 min,40%B;15~16 min,40%B → 48%B;16~26 min,48%B → 75%B;26~55 min,75%B → 95%B; 55~56 min,95%B → 99%B;56~60 min,99%B),流速 1.0 mL·min-1,檢測波長 325 nm,柱溫 30 ℃,進樣量 5 μL;理論塔板數以白花前胡甲素峰計算應不得小于 4 000。


2.2 混合對照品溶液的制備

取紫花前胡苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素、 白花前胡 E 素的對照品適量,精密稱定,加甲醇溶解 制成上述 4 個成分分別含 0.509 9、0.465 5、0.501 2、0.504 9 mg·mL-1 的混合對照品儲備液。精密量取混 合對照品儲備液 1.0 mL,置于 10 mL 量瓶中,加甲醇 稀釋至刻度線,搖勻,即得。



2.3 供試品溶液的制備

取樣品粉碎,過 4 號篩,取粉末約 0.25 g,精密稱 定,置 100 mL 錐形瓶中,精密加入甲醇 25 mL,稱定 質量,超聲處理(功率 240 W,頻率 45 kHz)20 min, 放冷,再稱定質量,用甲醇補足減失的量,搖勻,過 0.22 μm 微孔濾膜,取續濾液,即得。



3 特征圖譜

3.1 方法學考察

3.1.1  精 密 度 試 驗 


分 別 取 QH-01、ZHQH-01 及 YQH-01 號藥材粉末約 0.25 g,精 密 稱 定,分 別 按“2.3”項下方法制備供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件分別連續進樣 6 次,記錄色譜圖,考察儀 器的精密度。結果表明,各主要色譜峰保留時間的 RSD 均小于 0.5%;各主要色譜峰峰面積的 RSD 均 小于 3.0%,采用 Chempattern 化學計量學軟件進行 數據處理,相似度均大于 0.95,表明儀器的精密度 良好。



3.1.2  重 復 性 試 驗 

分 別 取 QH-01、ZHQH-01 及 YQH-01 號藥材粉末 6 份,精密稱定,按“2.3”項下 方法制備供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件分別 進樣分析,記錄色譜圖,考察方法的重復性。結果表 明,6 份樣品中各主要色譜峰保留時間的 RSD 均小 于 0.5%,各色譜峰峰面積的 RSD 均小于 1.5%,采用 Chempattern 化學計量學軟件進行數據處理,相似度 均大于 0.95,表明重復性良好。



3.1.3 穩定性試驗 

取精密度試驗項下供試品溶液, 按“2.1”項下色譜條件,分別在 0、4、8、12、18 h 進行 測定,考察供試品溶液的穩定性。結果表明,各主要 色譜峰保留時間的 RSD 均小于 0.6%,各色譜峰峰面 積的 RSD 均小于 3.0%,采用 Chempattern 化學計量 學軟件進行數據處理,相似度均大于 0.95,表明供試 品溶液的穩定性良好。



4 討論

本實驗考察了不同提取溶劑(甲醇、三氯甲烷、 50% 乙醇)、不同的提取方法(超聲、回流)及不同的 提取時間(10、20、30 min)等因素對提取效率的影 響,最終比較測定結果并結合環保的考慮,確定以甲 醇為提取溶劑,超聲提取 20 min,提取效率最高,方法 操作簡單,結果可靠。采用二極管陣列檢測器進行掃描,考察不同吸收 波長處的圖譜響應強度,紫花前胡苷、白花前胡甲素、 白花前胡乙素及白花前胡 E 素分別在 335.7、322.5、 320.1 及 322.5 nm 處有最大吸收,本研究側 重于前胡藥材中的主要香豆素類化合物,對 321、325 和 335 nm 處的譜圖信息比較發現,在 325 nm 處各成分 具有良好的紫外吸收,基線平穩,且色譜圖信息更豐富。本實驗采用特征圖譜結合主成分分析法,可有效 地區分前胡、紫花前胡、硬前胡,并可以找出對整體差 異性貢獻比較大的化學成分,為選擇指標成分進行質 量控制提供了科學依據。






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