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黃酮提取工藝及抗氧化活性剖析

返回列表 來源:未知 發布日期:2019-08-06 09:57【

分蘗洋蔥屬于蔥科蔥屬草本植物,是洋蔥的一個變種,其 鱗 莖 含 有 糖 類、 蛋白質、維生素以及黃酮類化合物、硫化物、甾體 皂苷類化合物等多種成分,具有抗菌、抗腫瘤、抗 動脈硬化、降血脂、降血壓、減少血栓等生物學功 能,是一種重要的藥食同源植物。槲皮素、槲皮 素葡糖糖苷、山奈酚是分蘗洋蔥中重要 的 黃 酮 類化合物,具有消除自由基、抑菌抗炎、降低糖 尿病和癌癥發生率、保護心血管系統等廣譜生理 活性。由于含量高于普通洋蔥,分蘗洋蔥是提取黃酮類化合物的重要原料。



1 材料與方法

1.1 試驗材料


供試材料為 紫 皮 分 蘗 洋 蔥‘M-3’的 鱗 莖,由 哈爾濱艾利 姆 農 業 科 技 有 限 公 司 提 供。選擇色澤光滑、大小均勻(橫 徑4.0~4.5cm)、健 康 緊 實 的 鱗 莖 洗 凈,去 除 膜 質外皮和鱗莖盤,切成細絲,于60℃烘箱內烘干, 粉碎機粉碎后過60目篩,備用。 蘆丁 標 準 品;無 水 乙 醇、亞 硝 酸 鈉、硝 酸 鋁、氫 氧 化 鈉、磷酸、抗 環 血 酸(VC)等試劑均為市售 分析純。 KQ-500DV 型數控超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有 限 公 司);UV-2550紫外可見分光光度 計(日本島津公司);ML-T分析天平;DHG-9145A 電 熱 恒 溫 鼓 風 干 燥 箱 (上海一 恒 科 學 儀 器 有 限 公 司);FW-177中 草 藥 粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司);RE-1302BV- OSB1200旋轉蒸發器(南京科爾儀器設備有限公 司);A10 超 純 水 系 統 (美 國 Merck Millipore公 司);ST16/16R 臺 式 離 心 機。



1.2 試驗方法

1.2.1 單因素試驗


分別以料液比、乙醇體積分數、提取溫度、提取 時間、超聲功率作為單因素,分析各因素對分蘗洋 蔥鱗莖總黃酮提取率的影響,每組試驗重復3次。


1)料液比對黃酮類化合物提取率的影響:稱 取10.0g分蘗洋蔥鱗莖粉末6份,在設定乙醇體積分數60%、超聲功率300 W、提 取 溫 度50 ℃、 提取時間40 min、料 液 比 分 別 為 1∶10、1∶20、 1∶30、1∶40、1∶50、1∶60g·mL-1的條件下進 行超聲輔助 提 取。加入體積分數為60%的 乙 醇 溶液100、200、300、400、500、600mL,用玻璃棒攪 拌。置于超聲 波 清 洗 機 內 加 熱 至 50 ℃,40 min 后取出。4000r·min-1離心5min,吸取上層清 液5.0 mL,加 入 5% 的 NaNO2 溶 液 1.4 mL, 搖勻后 靜 置6min,加 入10%的 Al(NO3)3 溶 液 1.4mL,搖勻后靜置6min,再加入1mol·L-1的 NaOH 溶液10mL,最后用濃度50%乙醇定容至 50mL,搖勻,靜置15min。測510nm 處吸光度 并計算提取率。比較相同條件下,不同料液比對 黃酮化合物提取率的影響。


2)乙醇體積分數對黃酮類化合物提取率的影 響:稱取10.0g分蘗洋蔥鱗莖粉末5份,在 料 液 比1∶40g·mL-1、超 聲 功 率300 W、加 熱 溫 度 50 ℃、提 取 時 間 40 min、分 別 加 入 40%、50%、 60%、70%、80%的乙醇溶液400mL的條件下進 行超聲輔助提取。比較相同條件下,不同乙醇濃 度對提取黃酮化合物的影響。


3)提取溫度對黃酮類化合物提取率 的 影 響:稱取10.0g分蘗洋蔥鱗莖粉 末6份,在 料 液 比1∶40g·mL-1、乙醇體積分數為60%、超 聲 功率300 W、提 取 時 間 40 min、分 別 加 熱 至 30、 40、50、60、70、80 ℃的條件下進行超聲輔助提取。 比較相同條件下,不同加熱溫度對黃酮化合物提 取率的影響。


4)提取時間對黃酮類化合物提取率 的 影 響:稱取10.0g分蘗洋蔥鱗莖粉 末6份,在 料 液 比1∶40g·mL-1、乙 醇 體 積 分 數60%、超 聲 功 率300 W、提取溫度50 ℃、提取時間分 別 為20、 30、40、50、60、70min的條件下進行超聲輔助提 取。比較相同條件下,不同提取時間對黃酮化合 物提取率的影響。


5)超聲功率對黃酮類化合物提取率 的 影 響:稱取10.0g分蘗洋蔥鱗莖粉 末6份,在 料 液 比1∶40g·mL-1、乙 醇 體 積 分 數60%、提 取 溫 度50 ℃、提取時間40min、功率分別為100、200、 300、400、500、600 W 的條件下進行超聲輔助提 取。比較相同條件下,不同微波功率對黃酮化合物提取率的影響。



2 結果與分析

在乙醇體積分數為60%、超聲功率為300 W、 提取溫度為50 ℃、超聲時間為40min的提取條 件下,不同料液比影響分蘗洋蔥總黃酮的提取率 (圖1A)。在料液比為1∶10~1∶40g·mL-1范 圍內,總黃酮提取率隨溶劑量的增加而顯著增大。 料液比為1∶40 mL·g-1時提取率達到最大值 (3.5725%)。當溶劑量超過1∶40g·mL-1時, 黃酮得率反而減少。其原因可能是在適宜的料液 比范圍內,溶質細胞分散好,加熱效率高,有利于 細胞破碎和胞內物質的釋放。過高或過低,都不 利于細胞對微波能吸收,而且,在溶質濃度過低情 況下會增加雜質的溶出量。表明料液比對總黃酮 提取率有顯著影響,因此選擇料液比1∶30、1∶ 40、1∶50g·mL-1進行響應面優化試驗。 2.1.2 乙醇體積分數對黃酮類化合物提取率的影響。


在料液比為1∶40g·mL-1、乙醇體積分數 為60%、提取溫度為60℃、超聲時間為40min條 件下,在超聲功 率 低 于300 W 范 圍 內,黃 酮 提 取 率隨功率的增強而增加;超過300 W 則總黃酮提 取率下 降(圖1E)。在300 W 以 下,通 過 超 聲 波 熱效應破壞細胞壁,使黃酮類化合物迅速分離出 來。但是,超聲 功 率 超 過300 W 時,總 黃 酮 提 取 率反而下降,可能是較強的超聲功率引起溶劑揮 發、溫度升高,減少了黃酮類化合物的析出,同時 也能破壞部分黃酮類化合物的分子結構。表明超 聲功率對總黃酮提取率有顯著影響,因此選擇超 聲功率200、300、400 W 進行響應面優化試驗。



3 討論與結論

植物總黃酮類化合物的提取方法有 很 多,該 研究采用響應面分析法優化了分蘗洋蔥鱗莖總黃 酮類化合物的超聲波輔助提取工藝條件,試驗結 果表明,當料液比為1∶45g·mL-1、乙醇體積分 數為60%、超聲功率為310 W、提取溫度為48 ℃、 提取時間為40min時,總黃酮類化合物的實際提 取率達到(3.584±0.085)%,高于李鵬 3.36% 的試驗結果,而且提取工藝條件也存在較大差異。 事實上,不同研究者用相同提取工藝獲得最佳工 藝條件存在差異。例如,同樣以洋蔥皮為材料、乙醇為提取 劑,劉 姝 辰 等提出的最佳工藝是乙 醇濃度75%、料 液 比1∶20g·mL-1、提 取 溫 度 55 ℃、提取時 間5h;而 李 玉 邯 等提 出 的 最 佳 工藝是乙醇 濃 度80%、料 液 比1∶35g·mL-1、 提取溫度70 ℃、提 取 時 間50 min。可 能 與 試 驗 材料品種、產地以及實驗室條件有關。該研究只 是利用一種分蘗洋蔥品種優化了超聲波輔助提取 法提取工藝,有必要利用不同產地不同品種分蘗 洋蔥,比較不同提取方法例如微波輔助法、乙醇回 流法等的提取效果,探討提取工藝與品種類型、產地的關聯。





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